Тематические исследования: Переход на новый набор для тестирования на микоплазму и освоение контроля изменений в лабораториях культивирования клеток

Заражение микоплазмой представляет собой одну из наиболее серьезных и распространенных угроз биобезопасности при культивировании клеток, биообработке и производстве клеточной и генной терапии (КГТ). Эти мельчайшие бактерии без стенок могут незаметно изменять клеточный метаболизм, скорость роста и экспрессию генов, не вызывая видимого помутнения, что ставит под угрозу целостность исследований и безопасность терапевтических продуктов.

Для лабораторий по контролю качества (QC) снижение этого риска требует точного, надежного и стандартизированного метода обнаружения. В то время как метод компендиального 28-дневного культивирования остается золотым стандартом регулирования, технология амплификации нуклеиновых кислот (NAT) в настоящее время широко признана в качестве более быстрого, дополнительного или альтернативного метода тестирования высвобождения, как эторекомендовано мировыми фармакопеями.

Переход от устаревшего метода анализа к современному, высокопроизводительному решению, такому как новыйнабор для тестирования на микоплазму, - это не просто техническая замена; это сложное мероприятие, которое регулируется строгими протоколами контроля изменений. Этот процесс требует тщательного планирования, всесторонней валидации и выбора анализа с доказанным соответствием требованиям и превосходными показателями эффективности. В этой статье рассматриваются стратегические императивы управления этими изменениями с использованием усовершенствованного набора для обнаружения микоплазм ResiQuant® (Taqman) от ExCell Bio в качестве яркого примера решения, разработанного с учетом строгих нормативных требований.

Строгость контроля за изменениями нормативных актов при тестировании на микоплазму

.  

В условиях строгого регулирования производства лекарственных средств и передовых терапевтическихтехнологий внесение изменений в анализ контроля качества, включая внедрение нового набора для тестирования на микоплазму, запускает официальную процедуру контроля изменений. Эта процедура необходима для того, чтобы доказать, что новый метод анализа эквивалентен существующему методу или лучше его и что изменение не создает новых рисков для качества или безопасности продукта.

Основная проблема заключается в соблюдении требований к валидации, изложенных в таких документах, как Европейская фармакопея (ЕР) 2.6.7, Фармакопея Соединенных Штатов (USP) и Японская фармакопея (JP) XVIII. Эти рекомендации требуют тщательного подтверждения аналитической чувствительности, специфичности и надежности, особенно при использовании NAT в качестве альтернативы культуральному методу.

Успешное практическое исследование управления изменениями часто основывается на демонстрации трех ключевых показателей эффективности:

л Чувствительность (предел обнаружения, LOD): Доказательство того, что новый набор может надежно обнаруживать микоплазму при требуемом пороговом значении, обычно определяемом как ≤10 ;колониеобразующих единиц (КОЕ) на миллилитр.

l Всеохватность/специфичность (охват): Обеспечение того, чтобы тест позволял выявлять наиболее значимые и специфичные виды микоплазм, включая M. pneumoniae, A. laidlawii и другие виды, упомянутые в EP 2.6.7.

l Надежность и толерантность к матриксу: Показывает, что анализ может быть последовательно проведен на различных матриксах образцов (например, супернатанте клеточной культуры, материале для сбора урожая, сырье) без ингибирования, что требует эффективной подготовки образцов и надежного внутреннего контроля.

 ;

Несоблюдение этих требований может привести к дорогостоящим задержкам, ссылкам на нормативные акты или, что еще хуже, к ложноотрицательным результатам, которые подвергают риску последующие партии.

;

Представляем решение ResiQuant®: высокопроизводительный набор для тестирования на микоплазму

;

Для управления изменениями control по сути, лаборатории должны выбрать набор для тестирования на микоплазму, который был бы полностью разработан с учетом соответствия фармакопейным требованиям и высокой производительности. Набор для обнаружения микоплазм ResiQuant® (Taqman), разработанный компанией ExCell Bioявляется примером этого инженерного стандарта.

В наборе используется платформа количественной ПЦР на основе Taqman (qPCR), нацеленная на высококонсервативный фрагмент гена, общий для Классмолликутов. Такое стратегическое нацеливание на гены обеспечивает исключительную широту и специфичность.

Точные технические характеристики продукта для валидации

Для облегчения контроля изменений технические характеристики набора ResiQuant® точно соответствуют требованиям нормативных органов:

l Предел обнаружения (LOD): Анализ показывает, что LOD составляет всего 10 КОЕ/мл для конкретных образцов микоплазм (например,M. arginini,M. hyorhinis), что соответствует минимальным критериям чувствительности, требуемым для альтернативных методов быстрого обнаружения в соответствии с рекомендациями EP, USP и JP.

l Видовой охват: Набор ResiQuant® валидирован для выявления приблизительно 202 видов микоплазм, обеспечивая широкий охват, который охватывает восемь видов, требуемых для валидации анализа в соответствии с EP 2.6.7, включая Mycoplasma pneumoniae(КОНЦЕНТРАЦИЯ: 9,4 Г/КОЕ), ИCHOleplasma laidlawii(концентрация: 5,1 г/КОЕ), и Mycoplasmahyorhinis (КОНЦЕНТРАЦИЯ: 9,5 Г/КОЕ).

l Соответствие нормативным требованиям: Характеристики набора были тщательно проверены в соответствии с требованиями к тестированию на микоплазму, изложенными в EP 2.6.7, JP XVIII и USP 77 — это не подлежащее обсуждению требование для применения в условиях GMP/GLP.

Практический пример: Переход к валидации и внедрению с помощью ExCell Bio

Процесс перехода упрощается, когда новый комплект разработан с интегрированным контролем загрязнения и решениями для обработки матриц. Втематическом исследовании описаны ключевые этапы успешного перехода на систему ResiQuant®:

Этап 1: Устранение загрязнений и ложных срабатываний

ПЦР-анализы, несмотря на свою чувствительность, подвержены остаточному загрязнению от ранее амплифицированных продуктов,что приводит к ложноположительным результатам. ExCell Bio kit решает эту проблему с помощью двух ключевых функций:

1. Система защиты от контаминации UNG: В состав набора входит обработка урацил-ДНК гликозилазой (UNG), которая устраняет любые загрязняющие продукты амплификации из предыдущих опытов до начала текущей реакции. Такое активное смягчение значительно снижает риск ложных срабатываний, придавая достоверность данным отрицательного контроля, необходимым для представления в регулирующие органы.

2. Технология qPCR с фиксацией результатов: Этот метод оптимизирует специфичность амплификации, сводя к минимуму неспецифическую амплификацию и фоновые помехи, которые в противном случае могли бы исказить результаты в сложных условиях отбора образцов.

Этап 2: Обеспечение целостности образцов и устранение ложноотрицательных результатов.

Наиболее существенным препятствием при валидации является обеспечение эффективного выделения ДНК в процессе подготовки образцов без ингибирования из сложных матриц (например, из-за высокого содержания белка, пеногасителей).

Для решения этой проблемысистема ResiQuant® объединена с набором для выделения ДНК микоплазмы ResiQuant®, который оптимизирован для надежного выделения следовых количеств ДНК микоплазмы из различных биологических образцов, таких как основные банки клеток, партии вирусных семян и конечные клеточные продукты.

Важно отметить, что в наборе для детектирования используется двухканальная система контроля качества:

1. PC (положительный контроль): Отслеживает общую чувствительность реакции qPCR.

2. RC (контроль извлечения): внутренний стандарт, применяемый для контроля как эффективности извлечения образца в процессе экстракции ДНК, так и наличия любых матричных помех, которые могут привести к ложноотрицательному результату.

В практическом исследовании по валидации успешная реализация требует демонстрации того, что значение порога цикла (Ct) контроля восстановления в тестируемых образцах находится в пределах допустимого диапазона (обычно ±2часа по КТ относительно контроля) по всем матрицам. Эта надежная система внутреннего мониторинга предоставляет достоверные доказательства того, чтотест на микоплазмуявляется точным даже в сложных образцах, удовлетворяя строгим требованиям проверки контроля изменений.

Создание надежной системы контроля качества с ExCell Bio

Решение о внедрении новейшего набора для тестирования на микоплазму является стратегической инвестицией в обеспечение качества. Благодаря переходу на систему ResiQuant® лаборатории успешно сокращают сроки тестирования с трудоемких 28 дней до нескольких часов, ускоряя выпуск партии без ущерба для безопасности.

Интеграция точных спецификаций, соответствующих требованиям фармакопеи, и встроенных средств контроля ложноотрицательных и положительных результатов делает набор для обнаружения микоплазмы ResiQuant® (Taqman) от ExCell Bio предпочтительным инструментом для контроля качества с высокими требованиями. Успешная реализация процесса контроля изменений, подтвержденная строгими данными валидации, обеспечивает необходимые нормативные доказательства для перехода к высокой эффективности. Этот переход в конечном итоге укрепляет биозащищенность конвейера культивирования клеток, ускоряя разработку и повышая безопасность производства лекарственных препаратов.