Как обнаружить заражение микоплазмой в культуре клеток

Присутствие микоплазмы представляет собой одно из наиболее распространенных и серьезных нарушений целостности культуры клеток. Поскольку эти загрязняющие вещества не создают видимого помутнения, для точной идентификации требуются специальные методы. Около М Биомы поддерживаем комплексный подход к этой проблеме, где правильный метод обнаружение микоплазмы и nbsp;защищает исследования обоснованность и непрерывность производства. В этой статье описаны основные методы, используемые для эффективного обнаружения микоплазм в лабораторных условиях.

Молекулярные методы: анализы на основе ПЦР

исследования по выявлению микоплазмы

Методы амплификации нуклеиновых кислот, в частности полимеразная цепная реакция (ПЦР), в настоящее время являются стандартом для выявления микоплазм. Этот метод нацелен на специфические, консервативные последовательности ДНК, уникальные для микоплазм. Основным преимуществомтеста на микоплазму на основе ПЦР является его высокая чувствительность и быстрота проведения, часто позволяющая получить результаты в течение нескольких часов. Он позволяет выявить очень низкий уровень загрязнения и эффективен для широкого спектра видов микоплазм. Однако он требует тщательной разработки, чтобы избежать перекрестной реактивности с клеточной ДНК, и не делает различий между жизнеспособными и нежизнеспособными организмами, что учитывается при интерпретации данных.

Традиционное микробиологическое культивирование

Культуральный метод, хотя и более медленный, остается наиболее эффективным и высокочувствительным методом определения микоплазм. Этот метод включает посев образца в специализированный бульон и агаровую среду, которые поддерживают рост микоплазм. Положительный результат подтверждается характерной морфологией колоний "жареного яйца" на твердом агаре после инкубационного периода продолжительностью до 28 дней. Его преимущество заключается в способности обнаруживать широкий спектр видов и подтверждать наличие жизнеспособных, способных к делению организмов. Многие фармакопейные руководства по-прежнему требуют или рекомендуют этот метод для тестирования конечного продукта из-за его доказанной надежности.

Прямое окрашивание и косвенные индикаторы

Альтернативные методы включают прямое окрашивание ДНК флуоресцентными красителями, такими как Hoechst 33258, которые связываются со всей ДНК. При наблюдении под флуоресцентным микроскопом микоплазмы проявляются в виде экстрануклеарных пятен на поверхности инфицированных клеток. Этот метод полезен в качестве быстрого скрининга, но требует опыта для точной интерпретации и менее чувствителен, чем ПЦР или культуральный анализ. Косвенные методы, такие как мониторинг изменений в клеточном метаболизме или темпах роста, могут сигнализировать о потенциальной проблеме, но не являются специфичными. Эти показатели должны побудить к проведению официального с использованием одного из основных, окончательных методов, перечисленных выше.

Надежное обнаружение микоплазм зависит от выбора подходящего, проверенного метода, соответствующего этапу работы и требованиям нормативных актов. Надежная программа контроля качества часто включает в себя более одного метода; например, использование ПЦР для частого и быстрого скрининга и культуральных методов для окончательной проверки. Разработка планового протокола тестирования на микоплазму является важнейшей мерой защиты, обеспечивающей необходимую уверенность в том, что клеточные культуры свободны от этого скрытого источника экспериментальной изменчивости и риска для продукта.